生姜蛋白酶是从生姜中提取的一种新型的水解蛋白质的催化剂,与木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶等属于丝氨酸家族蛋白酶,能特异水解由脯氨酸氨基组成的肽键。
目前生姜蛋白酶浓缩的方法主要有两种:一种是反胶束萃取法,另一种是以生姜丙酮干粉为原料的制备方法。两种方法各有特点,现分别介绍如下。反胶束萃取纯化生姜蛋白酶工艺,以阴离子反胶束从粗酶提取液中进行分离纯化生姜蛋白酶,其主要优点是选择性较高,可在室温下进行处理,反胶束经处理后可再次回用。
生姜蛋白酶分离浓缩设备主要步骤
①粉碎、提取称取Ikg采摘3天以内的新鲜生姜块茎,切成约1cm*1cm小块,加入4L温度为4℃、pH值为6.0的0.2mol/L磷酸缓冲液,置于高速组织匀浆机中粉碎,8层纱布过滤。收集滤液,滤渣再次用6L上述缓冲液分两次进行匀浆粉碎处理,同法过滤,弃滤渣,合井滤液。
②盐析将收集的滤液用离心机以4000r/min的转速离心10min,收集上清液,加入饱和硫酸按溶液进行盐析,使上清液中的硫酸钱终饱和度达到60%时止。
③脱盐将盐析液用离心机以4000r/min转速离心15min,收集不溶物用少量pH7.50的柠檬酸缓冲液溶解,在4℃下对同种缓冲液透析脱盐8h,获得粗生姜蛋白酶提取液。
④萃取除杂取1L粗生姜蛋白酶提取液,加入等体积0.05mol/L的AOT-异辛烷反胶束液,用电动搅拌器以2OOr/min搅拌萃取5min,以除去提取液中的部分杂蛋白。4000r/min离心10min,收集萃余液,再次用等体积0.05mol/L的AOT-异辛烷反胶束液同法萃取及分离。
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